①在筛选纯净的酵母菌菌种时，为了更容易得到单菌落，常用方法。扩大培养时，使用的培养基是（填“固体”或“液体”）培养基，并需要提供（填“有氧”或“无氧”）条件。
②酒精发酵装置中弯曲的安全玻璃管可以让瓶中的二氧化碳气体排出，还可以。为了制作酒精含量较高（体积分数约为15%）、糖含量也较高的葡萄酒，可以向果汁中加入适量。
③果醋发酵过程中，随着发酵的进行，乙醇含量逐渐下降，这是由于醋杆菌在和酸性环境下将乙醇氧化为醋酸。醋杆菌产生的醋酸可使培养液中的pH值最低达到。
A.2-3 B.3-4 C.4-5 D.5-6
基因敲除是针对某个序列已知但功能未知的基因，改变其基因结构，令该基因功能丧失，从而对生物体造成影响，进而推测出该基因功能的一门技术。以下是制备基因敲除小鼠的过程示意图。
请回答：
①为了获得目的基因，可以用或者PCR扩增法。构建基因敲除载体时需要的工具酶有。
②为了得到胚胎干细胞，可以用消化胚胎组织中的胶原纤维和细胞外的其他成分，获得单个胚胎细胞悬浮液，然后进行原代培养和传代培养。也可以直接将胚胎组织从机体中取出后立即进行细胞、组织培养，当细胞从组织块中迁移出来，形成并增大后，再传代培养。
③将囊胚移植到代孕母鼠体内后，其外表的一层扁平细胞，将来会发育为。生产出的一只嵌合体小鼠与野生型小鼠杂交后（假设子代足够多）（一定、不一定）能得到杂合子基因敲除小鼠。基因敲除技术具有广阔的应用前景，请举一例。
