1. (2024高三下·衡阳开学考) “中天杨”是由我国科学家采用生物转基因技术，历经8年时间培育成功的抗盐碱、耐干旱的杨树新品种。该品种以八里庄杨为实验材料，经转mtl-D基因培育获得。如图为培育“中天杨”的操作流程，①~⑥表示操作过程，该过程中可能用到的限制酶如表所示。回答下列问题。

注：Ti质粒中的Tet^r为四环素抗性基因，Amp^r为氨节青霉素抗性基因。

限制酶	BclⅠ	EcoRⅠ	XbaⅠ	Sau3AⅠ	BamHⅠ
切割位点	T↓GATCA	G↓AATTC	T↓CTAGA	↓GATC	G↓GATCC

1. （1） 与杂交育种相比，基因工程育种的优点有(填序号)。

   ①操作方法简便②目的性强，能定向改造生物性状③育种周期短④不受生殖隔离限制，能克服远缘杂交不亲和障碍⑤安全性高，对生态没有威胁

3. （2） 过程①需要的酶是，过程②需要的工具酶是。
5. （3） 采用PCR技术扩增目的基因时，在PCR反应体系中需加入引物，引物的作用是，若目的基因扩增3代，则共用引物个。PCR完成以后，常采用法来鉴定PCR的产物。
7. （4） 培育转基因杨树的核心工作是，在进行该工作时，应在mtl-D基因的两侧添加限制酶的识别序列。
9. （5） 将目的基因导入受体细胞除图示方法外，还有。为了确认目的基因在植物细胞中是否成功表达，从分子水平通常使用法进行检测。