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  • 1. (2020高三上·如皋开学考) 人乳铁蛋白(hLF)对细菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人员开展人乳铁蛋白基因乳腺特异性表达载体构建及转染研究,主要流程如下图。RT-PCR过程需先进行逆转录合成DNA,然后再进行PCR。图中Ase I、Nhe I、Sal I、BamH I代表相关限制酶切点,neor为新霉素抗性基因,BLG基因为B乳球蛋白基因,GFP基因为绿色荧光蛋白基因。请回答:

    1. (1) 过程①中,不能从人肌肉细胞中提取RNA用于RT-PCR,是因为。在RT-PCR过程中,加入的引物需在端添加两种限制酶的识别序列,以便于hLF基因插入pEB中。
    2. (2) 过程②中,hLF基因插入到BLG基因之后的目的是
    3. (3) 将转染后的山羊乳腺上皮细胞先置于含新霉素的培养液中培养,能够存活的细胞应该是导入的细胞,再利用荧光显微镜观察山羊乳腺上皮细胞中,以筛选出转染成功的细胞。
    4. (4) 科研过程中,也可以用PCR技术检测受体细胞是否成功转入了目的基因。提取转染后的细胞的全部DNA分子,用目的基因的引物扩增后进行DNA电泳,结果如图所示:1号泳道为标准(Marker),2号泳道为阳性对照(提纯的目的基因片段),3号泳道为实验组。请问,标准(Marker)的实质为,3号泳道的杂带出现的原因一般有(在下列选项中选择)。

      ①模板受到污染    ②引物的特异性不强    ③退火温度偏低 „温度偏高

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