普通棉花中含β-甘露糖苷酶基因（GhMnaA2），能在纤维细胞中特异性表达，产生的β-甘露糖苷酶催化半纤维素降解，棉纤维长度变短，为了培养新的棉花品种，科研人员构建了反义GhMnaA2基因表达载体，利用农杆菌转化法导入棉花细胞，成功获得转

1. (2017高二上·苏州期末) 普通棉花中含β-甘露糖苷酶基因（GhMnaA2），能在纤维细胞中特异性表达，产生的β-甘露糖苷酶催化半纤维素降解，棉纤维长度变短，为了培养新的棉花品种，科研人员构建了反义GhMnaA2基因表达载体，利用农杆菌转化法导入棉花细胞，成功获得转基因棉花品种，具体过程如下，请分析回答：
1. （1） ①和②过程中所用的限制性内切酶分是、。
3. （2）基因表达载体除了图示组成外，至少有等（至少答两个）。
5. （3） ③过程中用酶切法可鉴定正、反义表达载体。用SmaⅠ酶和NotⅠ酶完全切割正义基因表达载体获得0.05kb、3.25kb、5.95kb、9.45kb四种长度的DNA片段，则用NotⅠ酶切反义基因表达载体获得DNA片段的长度应是和。
7. （4） ④过程中利用农杆菌介导转化棉花细胞的过程中，整合到棉花细胞染色体DNA的区段是，转化后的细胞再通过形成植物体。
9. （5）导入细胞内的反义GhMnaA2转录的mRNA能与细胞内的GhMnaA2转录的mRNA互补配对，从而（促进或抑制）基因的表达，其意义是。

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1. (2022高二上·成都期中) 西北黄土高原是我国最大的苹果产区，干旱缺水是限制该地区苹果产业发展的主要环境因素之一，研究发现苹果细胞中存在一种对干旱具有一定抗性的基因——MdMYB48基因。现为了使拟南芥也获得抗旱性，研究者将MdMYB48基因导入了拟南芥细胞中，下图是获得抗干旱拟南芥的过程示意图。回答下列问题。
1. （1） MdMYB48基因与Ti质粒能重组在一起的前提是用相同的限制酶处理后获得相同的。
2. （2） MdMYB48基因能转入到拟南芥细胞染色体DNA中的结构基础是。
3. （3）当MdMYB48基因转入拟南芥细胞后，需要对其是否成功表达进行检测和鉴定，此时基因成功表达的直接证据是。
4. （4）将导入外源基因的拟南芥细胞培育成拟南芥植株，利用的原理是。
5. （5）利用基因工程育种的优点是（答出1点即可）。
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2. (2021高二上·黄浦期末) 有些人体内缺乏足够的乳糖酶（LCT），无法充分消化牛奶中的乳糖，会导致喝奶后产生腹泻等不良反应。我国科研人员利用转基因技术和克隆技术培育出了可产低乳糖牛奶的拉克斯牛，培育过程如图所示，A～C表示操作步骤。（图中胚胎成纤维细胞是由胚胎干细胞经分裂分化后产生的一类仍具有分裂能力的细胞）
1. （1）通过步骤A获取重组质粒T时，除需要限制酶BamHI外，还需要等酶的参与。实现步骤B常用的方法是，步骤C中的技术被称为。
2. （2）动物基因工程中常用受精卵作为受体细胞，而在拉克斯牛的培育过程中选择胚胎成纤维细胞作为受体细胞，此举有何意义：。
3. （3）在现有的技术条件下，还不能直接将重组细胞1培养成一个新个体，而必须获取重组细胞2后才能发育成新个体，你认为原因最可能是。
  
  A . 重组细胞2的细胞核才具有全能性 B . 重组细胞2的核DNA与重组细胞1不同 C . 重组细胞2中核基因的表达情况与重组细胞1不同 D . 卵细胞较大，便于操作
4. （4）下列对拉克斯牛的分析中正确的有。
  
  A . 拉克斯牛体内的神经、肌肉和乳腺细胞中均含有乳糖酶基因 B . 除乳糖酶基因外，拉克斯牛的核基因与图中黑白花奶牛相同 C . 对图中拉克斯牛进行克隆繁育，无法获得雄拉克斯牛 D . 导入了乳糖酶基因的重组细胞2，一定能培育出拉克斯牛
5. （5）科研人员发现，拉克斯牛所产的牛奶除乳糖含量低之外，还含有高活性的乳糖酶，可用于生产工业用乳糖酶。在此生产过程中，用于将乳糖酶与乳清蛋白分离的操作技术是。
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3. 癌症的免疫疗法通过重新激活抗肿瘤的免疫细胞，克服肿瘤的免疫逃逸，在癌症治疗方法中取得越来越突出地位，科研人员在不断研究中发现多种免疫治疗方法的结合是提高治疗效果的途径之一。
1. （1）某些种类癌细胞表面高表达膜蛋白PSMA和PD-L1，如图1。PD-L1能抑制T细胞的活化，使癌细胞发生免疫逃逸。单克隆抗体最主要的优点在于。临床上可利用PD-1的单克隆抗体进行癌症治疗。将等量的纯化PD-1蛋白分别注射到5只小鼠体内，经过二次免疫后测定小鼠抗PD-1抗体的免疫效果，取其中免疫效果最好的1号小鼠用于后面的融合实验。在融合前三天，对1号小鼠加强免疫一次，目的是。然后取小鼠的脾脏细胞用试剂诱导与骨髓瘤细胞融合，用选择培养基进行筛选得到杂交瘤细胞。
2. （2）一段时间后，将（1）所得细胞接种到多孔培养板上，进行抗体阳性检测，检测原理如上图。
  ①在检测时需要将PD-1蛋白固定于周相载体表面制成，并加入多孔板培养槽中的（细胞、上清液），即待测样木。
  ②加入酶标抗体后一段时间，需要用洗涤剂将未与结合的酶标抗体洗去。
  ③加入相应酶促反应底物显色后，颜色的深浅可代表。
3. （3） CD28是T细胞表面受体，T细胞的有效激活依赖于CD28在癌细胞与T细胞结合部位的聚集。因此，科研人员尝试构建既能结合PSMA，还能结合CD28的双特异性抗体PSMAXCD28，诱导T细胞定向杀伤癌细胞，如图2。制备过程为：先将分别注射到小鼠体内，分离出B淋巴细胞，诱导其与小鼠的骨髓瘤细胞融合，筛选得到两种杂交瘤细胞，再诱导两种细胞融合。成功融合的细胞会表达两种L链和两种H链，由于L链和H链的随机组合会。因此还需进行筛选才能获得所需的双特异性抗体PSMA×CD28。
4. （4）在肿瘤患者的治疗中，被动免疫治疗是指被动地将具有抗肿瘤活性的免疫制剂或细胞回输给肿瘤患者机体进行治疗，该治疗方案适用于肿瘤晚期患者，除了单克隆抗体治疗外，还可以进行过继性细胞治疗，过继性细胞治疗相关过程如图所示过继性细胞治疗中，从肿瘤患者体内获取的免疫细胞置于适宜环境下培养，培养过程中会出现分裂受阻，其原因主要有（答出2点），培养过程中出现接触抑制现象时，可用酶处理贴壁细胞使之分散成单个细胞进行传代培养。
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1. (2021·全国甲) [生物——选修3：现代生物科技专题]
PCR技术可用于临床的病原菌检测。为检测病人是否感染了某种病原菌，医生进行了相关操作：①分析PCR扩增结果；②从病人组织样本中提取DNA；③利用PCR扩增DNA片段；④采集病人组织样本。回答下列问题：
1. （1）若要得到正确的检测结果，正确的操作顺序应该是（用数字序号表示）。
2. （2）操作③中使用的酶是，PCR 反应中的每次循环可分为变性、复性、三步，其中复性的结果是。
3. （3）为了做出正确的诊断，PCR反应所用的引物应该能与特异性结合。
4. （4） PCR（多聚酶链式反应）技术是指。该技术目前被广泛地应用于疾病诊断等方面。
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2. (2022·天津) 研究者拟构建高效筛选系统，将改进的苯丙氨酸合成关键酶基因P1导入谷氨酸棒杆菌，以提高苯丙氨酸产量。
1. （1）如图是该高效筛选系统载体的构建过程。载体1中含有Kan^R（卡那霉素抗性基因）和SacB两个标记基因，为去除筛选效率较低的SacB，应选择引物和，并在引物的（5＇∕3＇）端引入XhoⅠ酶识别序列，进行PCR扩增，产物经酶切、连接后环化成载体2。
2. （2） PCR扩增载体3中筛选效率较高的标记基因RpsL（链霉素敏感基因）时，引物应包含（EcoRⅠ∕HindⅢ∕XhoⅠ）酶识别序列，产物经单酶切后连接到载体2构建高效筛选载体4。
3. （3）将改进的P1基因整合到载体4构建载体5。将载体5导入链霉素不敏感（由RpsL突变造成）、卡那霉素敏感的受体菌。为获得成功导入载体5的菌株，应采用含有的平板进行初步筛选。
4. （4）用一定的方法筛选出如下菌株：P1基因脱离载体5并整合到受体菌拟核DNA，且载体5上其他DNA片段全部丢失。该菌的表型为__________。
  
  A . 卡那霉素不敏感、链霉素敏感 B . 卡那霉素敏感、链霉素不敏感 C . 卡那霉素和链霉素都敏感 D . 卡那霉素和链霉素都不敏感
5. （5）可采用技术鉴定成功整合P1基因的菌株。之后以发酵法检测苯丙氨酸产量。
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3. (2022·辽宁) 碳达峰和碳中和目标的提出是构建人类命运共同体的时代要求，增加碳存储是实现碳中和的重要举措。被海洋捕获的碳称为蓝碳，滨海湿地是海岸带蓝碳生态系统的主体。回答下列问题：
1. （1）碳存储离不开碳循环。生态系统碳循环是指组成生物体的碳元素在和之间循环往复的过程。
2. （2）滨海湿地单位面积的碳埋藏速率是陆地生态系统的15倍，主要原因是湿地中饱和水环境使土壤微生物处于条件，导致土壤有机质分解速率。
3. （3）为促进受损湿地的次生演替，提高湿地蓝碳储量，辽宁省实施“退养还湿”生态修复工程（如图1）。该工程应遵循（答出两点即可）生态学基本原理，根据物种在湿地群落中的差异，适时补种适宜的物种，以加快群落演替速度。
4. （4）测定盐沼湿地不同植物群落的碳储量，发现翅碱蓬阶段为180.5kg·hm^-2、芦苇阶段为3367.2kg·hm^-2 ，说明在的不同阶段，盐沼湿地植被的碳储量差异很大。
5. （5）图2是盐沼湿地中两种主要植物翅碱蓬、芦苇的示意图。据图分析可知，对促进海岸滩涂淤积，增加盐沼湿地面积贡献度高的植物是，原因是。
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江苏省苏州市2016-2017学年高二上学期生物期末考试试卷