1. (2023高三上·松江月考) 在未断奶的小牛胃中存在一种凝乳酶，其凝乳及蛋白水解功能可使奶制品形成特殊风味和质地，被广泛应用于奶酪和酸奶生产。图10为利用生物工程技术生产凝乳酶的过程，①-④为具体操作步骤。

1. （1） 根据题干信息及所学知识，步骤①中提取的质粒中应含有（    ）。（多选）

   A . 目的基因 B . 启动子和终止子 C . 标记基因 D . 起始密码子和终止密码子
3. （2） 图11是从小牛胃中分离得到的含凝乳酶基因的DNA，其两端的序列已知。限制性内切核酸酶的酶切位点如图所示。

   

   可以采用扩增该DNA。（编号选填）

   ①化学合成法 ②聚合酶链式反应 ③大规模筛选法

5. （3） 要成功扩增出凝乳酶基因，所设计的引物应结合在图11中的位置。（用图11中的编号选填）
7. （4） 切割目的基因选用的限制性内切核酸酶是。（编号选填）

   ①HindⅢ ②EcoRⅠ ③Bam HⅠ 

9. （5） 图12是研究人员利用平板划线法，分离纯化得到的含重组质粒的大肠杆菌。由菌落分布规律可知，划线顺序应为。（用编号和箭头表示）

   

11. （6） 挑取图12中的菌落转接至图13所示培养基，用于扩大培养。下列步骤可能涉及图13培养基的配制过程，请选择正确的编号并排序。（用编号和箭头表示）

    ①倒平板 ②调整pH ③溶解 ④灭菌 ⑤称量 ⑥分装

13. （7） 研究发现，通过图10过程获得的凝乳酶活性较低，请分析可能的原因。
15. （8） 已知凝乳酶第20、24位氨基酸变成半胱氨酸，其活性可显著提高。科研人员希望运用蛋白质工程技术从大肠杆菌中获得活性更强的凝乳酶，请选用合适的措施编号并排序。（用编号和箭头表示）

    ①重组DNA分子导入大肠杆菌 ②随机改变凝乳酶基因的序列

    ③对突变蛋白进行结构和功能分析 ④改变凝乳酶基因的特定序列

    ⑤培养细胞后提纯突变蛋白 ⑥将改变后的凝乳酶基因与质粒重组