科研人员将HSA基因转入酵母菌细胞，获得了重组人血清白蛋白。图为酵母菌基因改造以及工业化发酵生产rHSA的过程示意图，其中I、II、III、IV是四种不同的限制酶，具各自识别的酶切位点如表所示。
| 限制酶 | I | II | III | IV |
| 识别序列及切割位点 |  |  |  |  |
①随着测序技术的发展，为获取人血清白蛋白基因，可通过检索获取其编码序列，用化学合成法制备得到。将HSA基因插入质粒中时，最好选择限制酶进行共同切割。将受体酵母菌置于含有的培养基中进行筛选培养，以获得能表达HSA的细胞。
②采用PCR等技术可检测目的基因是否插入酵母菌染色体中，得到的PCR产物一般通过来鉴定，DNA分子的迁移速率与有关（答出2点即可）。
③工业化发酵生产rHSA的过程一般包括菌种的选育，扩大培养、接种、发酵、产品的分离、提纯等方面，将rHSA工程菌接种至发酵罐内进行扩增，培养过程中可定期取样并使用细菌计数板对（填“菌体”或“菌落”）进行直接计数，以评估增殖情况。发酵结束后，采用（答出2点即可）等方法获得所需的发酵产品。
I.采集良种供体牛的卵母细胞和精液，通过体外受精，形成奶牛受精卵；
II.构建基因的表达载体，并将其导人奶牛受精卵，形成转基因细胞；
III.电脉冲刺激转基因细胞促使其形成早期胚胎；
IV.将胚胎移植到受体母牛的子宫中，最终发育成转基因小牛。
①实验步骤I中，在体外受精前，需要对奶牛的精子进行处理。
②实验步骤II中，将人的血清白蛋白基因导人奶牛受精卵最为有效的方法是。
③实验步骤III中进行动物早期胚胎的体外培养时，培养液中通常要加入等 天然成分，培养条件要求无毒、无菌的环境，具体措施有（答出两点即可）。当胚胎发育至囊胚阶段，取其做DNA分析来进行性别鉴定，筛选出发育状态良好的雄性胚胎进行移植。
④实验步骤IV进行胚胎移植，其实质是。为实现这一工序，需用相应激素对受体
进行处理。
⑤有人提议将乳腺反应器改成膀胱反应器，请分析利用膀胱反应器比乳腺反应器产量高的原因（答出两点即可）。
