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  • 1. (2023高三上·浙江模拟) 研究者改造与肠道共生的大肠杆菌,口服该工程菌后激活机体特异性免疫,实现肿瘤的预防和治疗。部分肠道细菌能够分泌外膜囊泡(OMV),OMV能穿越肠道上皮屏障活化肠黏膜内丰富的免疫细胞(如图1)。细菌溶素A(ClyA)是外膜囊泡上含量较高的特异蛋白。

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    1. (1) 构建表达载体:研究者利用含图2所示元件的表达载体转化大肠杆菌制备工程菌,ClyA基因的作用是表达ClyA,使定位至OMV表面;Fc表达产物能够与树突状细胞表面的特异性受体结合,提高树突状细胞OMV的能力。
    2. (2) 工程菌的制备与培养:为了便于将表达载体导入大肠杆菌,可用CaCl2处理,以提高细菌(结构)的通透性。然后将已改造的工程菌置于LB培养基中培养,并不断进行搅拌。
    3. (3) 检测:可用核酸分子杂交技术,或先对融合基因进行,然后再进行凝胶电泳加以鉴定。琼脂糖凝胶的孔隙可起到的作用,一般来说,DNA分子量越小,配制琼脂糖凝胶的浓度越。凝胶浸没于电泳缓冲液中,电泳缓冲液的作用是。DNA本身是无色的,可以用将DNA染色。如果最终在凝胶上出现多个条带,推测可能的原因有。(写出两点)
    4. (4) 使用:患者应将工程菌与一同口服,在肠道繁殖并表达后,使人体产生对的特异性免疫反应。

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