1. (2023高三下·浙江月考) 番茄的果实营养丰富，具特殊风味，是深受人们喜爱的蔬果，但番茄不抗冻，在我国冬季无法栽培。现有科研人员利用转基因技术，将北极海鱼中的抗冻基因转入到了番茄细胞中，从而培育成功抗冻番茄。导入目的基因的方法是农杆菌转化法，图1为培育过程使用的Ti质粒，已知Vir区的基因活化能促进T﹣DNA的加工和转移。回答下列问题：

1. （1） 若经过诱变，北极海鱼的一条染色体上的抗冻基因发生了碱基对的替换，导致抗冻能力大大增强，通过琼脂糖凝胶电泳，能否区分突变前后的两个抗冻基因？，请说明理由 。
3. （2） 对于目的基因的获取，研究人员提取了抗冻蛋白，根据氨基酸序列分析了mRNA的碱基序列，继而合成了抗冻基因，通过这种方法得到的目的基因因不含 、，故无法扩增和表达。选择图示Ti质粒构建基因表达载体，应选择限制酶 （填“Ⅰ”或“Ⅱ”或“Ⅲ”），不选其它限制酶的理由是 。
5. （3） 为筛选成功导入抗冻基因的番茄细胞，在培养基中添加 。将筛选后获得的番茄细胞经 过程形成愈伤组织后，经器官发生途径或 途径发育形成植株，再在 条件下筛选出具有抗冻性状的番茄植株。
7. （4） 研究人员想比较不同转基因番茄中抗冻蛋白的合成量，制备相应的单克隆抗体，利用图2所示原理进行检测。

   ①检测前，先将抗冻蛋白的单克隆抗体固定在支持物上，然后向该检测体系中加入一定量的番茄植株中提取的蛋白质（待测抗原）和等量酶标记抗冻蛋白（酶标记抗原），目的是让待测抗原、酶标记抗原与抗体 结合。

   ②保温一段时间后洗涤，再向检测体系中加入一定量的白色底物，若检测体系蓝色越 ，则说明番茄提取物中抗冻蛋白的含量越高。

   ③本检测方法中的单克隆抗体可经杂交瘤细胞体外培养或注射到小鼠腹腔克隆化培养后，分别从 、中提取。