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  • 1. (2017高三下·淄博模拟) 人抗凝血酶Ⅲ由人体肝细胞产生,具有抗凝血、防血栓的作用.研究人员通过培育山羊乳腺生物反应器大量生产人抗凝血酶Ⅲ.请回答下列问题:

    1. (1) 获取人抗凝血酶Ⅲ基因常用方法有两种,一种是从人的中获取该基因mRNA,逆转录成cDNA.另一种是PCR,根据人抗凝血酶Ⅲ基因上游及下游的碱基序列,设计2种特异性引物,从染色体DNA上获取并扩增人抗凝血酶Ⅲ基因.在PCR过程中,两个引物是的结合位点,也是子链延伸的起点,dNTP(dATP、dCTP、dGTP、dTTP)在此过程中的作用是提供
    2. (2) 重组人抗凝血酶Ⅲ基因表达载体由山羊β﹣酪蛋白基因启动子、人抗凝血酶Ⅲ基因、标记基因和终止子组成,其中决定了人抗凝血酶Ⅲ基因只能在山羊乳腺细胞中特异性表达.
    3. (3) 山羊的ES细胞来自早期胚胎干细胞.在饲养层细胞上培养时,ES细胞具有的特性.将重组人抗凝血酶Ⅲ基因表达载体包埋在由磷脂双分子层构成的脂质体内并转染ES细胞时,该表达载体进入ES细胞的方式为
    4. (4) 对山羊进行同期发情和超数排卵处理,得到代孕母羊和多个卵母细胞,当卵母细胞培养至时,可去核并移入上述ES细胞的细胞核,完成核移植.为选择雌性胚胎,可在囊胚时取滋养层细胞做分析用以鉴定性别.对于羊奶中是否含有人抗凝血酶Ⅲ,可用抗原﹣抗体杂交方法检测.

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