甜味蛋白 Brazzein 是从一种西非热带植物的果实中分离得到的一种相对分子质量较小的蛋白质，它含有54 个氨基酸，是目前最好的糖类替代品。迄今为止，已发现 Brazzein基因在数种细菌、真菌和高等植物、动物细胞中都能表达。回答下列问

1. (2021高三下·吉林月考) 甜味蛋白 Brazzein 是从一种西非热带植物的果实中分离得到的一种相对分子质量较小的蛋白质，它含有54 个氨基酸，是目前最好的糖类替代品。迄今为止，已发现 Brazzein基因在数种细菌、真菌和高等植物、动物细胞中都能表达。回答下列问题:
1. （1）从基因文库中提取Brazzein 基因时，根据 Brazzein 基因的核苷酸序列、、，以及基因的表达产物蛋白质等特性来获取。
3. （2）基因工程的核心步骤是。将Brazzein 基因导入细菌、真菌和高等植物细胞时都可使用的常用载体是。
5. （3）若受体细胞是大肠杆菌，首先用处理细胞，使其成为感受态细胞。Brazzein基因在大肠杆菌细胞内表达时，表达出的蛋白质可能会被降解。为防止蛋白质被降解，在实验中应选用的大肠杆菌作为受体细胞，在蛋白质纯化的过程中应添加的抑制剂。

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1. (2023高三下·安徽开学考) 基因工程在医药工业上得到广泛的应用。科学家将人的生长激素基因转入大肠杆菌中，通过发酵生产人的生长激素，基本程序如图1所示；图2为重组质粒，其中Sau3AⅠ和BamHⅠ为两种限制酶。请回答下列相关问题：
1. （1）图1中快速获得大量的人生长激素基因的技术是，获得的产物通常采用
  技术来鉴定。
2. （2）分析图1和图2，在构建重组质粒时应使用切割质粒；不选择另一种限制酶的原因是。
3. （3）在目的基因的筛选步骤中，培养大肠杆菌的培养基中应加入。从培养基用途上看，该培养基属于培养基。
4. （4）利用该工程菌生产时，废弃培养液需要通过处理后才能排放到外界环境中。
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2. (2022高三下·大庆月考) 熊猫在自然条件下受精困难，产子率较低，可以通过胚胎工程提高熊猫的产子率。根据所学知识回答下列问题：
1. （1）自然条件下，熊猫的受精作用是在雌性动物的内完成的。当在卵细胞膜和透明带的间隙可以观察到时，说明卵子已经受精了。
2. （2）一般情况科学家用体外受精技术和胚胎移植等方法，提高熊猫的产子率，常用激素处理母体使其超数排卵，精子和卵子在体外受精后发育成早期胚胎。在胚胎移植过程中，移入子宫的胚胎能在受体内存活的生理学基础是。
3. （3）为了进一步提高熊猫的产子率，科学家用了胚胎分割技术，该技术是动物的（生殖方式），所以子代和分割的母体性状完全相同。进行胚胎分割时，应选择发育良好、形态正常的胚或囊胚，在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要注意将均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。
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3. (2024高三下·成都开学考) 有些人由于乳糖酶分泌少，不能完全消化牛奶中的乳糖，饮用牛奶后易出现腹泻等不适症状，这称为乳糖不耐受。为了解决这一问题，科学家将肠乳糖酶基因导入奶牛受精卵，使获得的转基因奶牛分泌的乳汁中，乳糖的含量大大降低，而其他营养成分不受影响。根据如下操作流程回答相关问题：
1. （1）通过图中②过程采集的B奶牛精子不能直接使成熟的卵细胞受精，常要用化学诱导法对奶牛的精子进行处理，即用一定浓度的处理。
2. （2）为了获得更多的卵母细胞，在进行①过程前，需要用处理奶牛A，从输卵管中采集卵母细胞后，还需要体外培养至期，才可以进行③过程；③过程表示的胚胎工程技术为。
3. （3） ④过程表示基因表达载体的建构过程，概述其操作流程。
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1. (2022·浙江) 回答下列（1）、（2）小题：
1. （1）回答与产淀粉酶的枯草杆菌育种有关的问题：
  Ⅰ.为快速分离产淀粉酶的枯草杆菌，可将土样用制成悬液，再将含有悬液的三角瓶置于80℃的中保温一段时间，其目的是。
  
  Ⅱ.为提高筛选效率，可将菌种的过程与菌种的产酶性能测定一起进行：将上述悬液稀释后涂布于淀粉为唯一碳源的固体培养基上培养，采用显色方法，根据透明圈与菌落直径比值的大小，可粗略估计出菌株是否产酶及产酶性能。
  
  Ⅲ.为了获得高产淀粉酶的枯草杆菌，可利用现有菌种，通过后再筛选获得，或利用转基因、等技术获得。
2. （2）回答与植物转基因和植物克隆有关的问题：
  Ⅳ.在用农杆菌侵染的方法进行植物转基因过程中，通常要使用抗生素，其目的一是抑制生长，二是筛选转化细胞。当选择培养基中抗生素浓度时，通常会出现较多假阳性植株，因此在转基因前需要对受体进行抗生素的检测。
  
  Ⅴ.为提高培育转基因植株的成功率，植物转基因受体需具有较强的能力和遗传稳定性。对培养的受体细胞遗传稳定性的早期检测，可通过观察细胞内形态是否改变进行判断，也可通过观察分裂期染色体的，分析染色体组型是否改变进行判断。
  
  Ⅵ.植物转基因受体全能性表达程度的高低主要与受体的基因型、培养环境、继代次数和长短等有关。同时也与受体的取材有关，其中受体为时全能性表达能力最高。
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2. (2022·江苏) 纤毛是广泛存在的细胞表面结构，功能异常可引起多种疾病。因此，研究纤毛形成的作用机制具有重要意义。请回答下列问题。

（1）纤毛结构如图1所示，由细胞膜延伸形成的纤毛膜主要由组成。基体由中心体转变而来，中心体在有丝分裂中的功能是。
（2）某病人肾小管上皮细胞纤毛异常，为了分析纤毛相关基因X是否发生了变异，对基因X进行了PCR扩增与产物测序。从细胞样品中分离DNA时，可通过交替调节盐浓度将与核蛋白结合的DNA分离出来，溶液中添加NaCl至2.0mol/L的目的是。PCR扩增时，需在催化下，在引物端进行DNA链的延伸，获得扩增产物用于测序。

（3）为研究蛋白质X在细胞中的定位，构建绿色荧光蛋白GFP与X的融合蛋白，融合蛋白具有绿色荧光，可示其在细胞内位置。将X-GFP基因融合片段M导入如图Ⅱ所示载体质粒Y，构建Y-M重组质粒（在EcoRⅤ位点插入片段）。请完成下表。

分步实验目标	简易操作、结果、分析
PCR鉴定正向重组质粒Y-M（图Ⅱ中融合片段M中有白色的箭头，代表方向）	①选择图Ⅱ引物； ②PCR目的产物约为bp。
确保M及连接处序列正确，Y-M的连接处上游含有Hind III+EcoR V的识别序列，下游含有EcoR V+BamH I的识别序列	③质粒测序，图Ⅲ中正确的是（选填序列编号）
检测融合蛋白定位	④对照质粒Y-GFP（仅表达GFP）与实验质粒Y-M分别导入细胞，发现对照组整个细胞均有绿色荧光，而实验组荧光集中在纤毛基部，说明。

（4）为研究另一纤毛病相关基因Z表达的变化，采用荧光定量PCR法检测健康人与病人基因Z的转录水平。采集样本、提取总RNA，经形成cDNA作为模板，PCR扩增结果显示，在总cDNA模板量相等的条件下，健康人Ct值为15，而病人Ct值为20（Ct值是产物荧光强度达到设定阈值时的PCR循环数）。从理论上估算，在PCR扩增20个循环的产物中，健康人样品的目的产物大约是病人的倍。

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3. (2022·北京) 生态文明建设已成为我国的基本国策。水中雌激素类物质（E物质）污染会导致鱼类雌性化等异常，并通过食物链影响人体健康和生态安全。原产南亚的斑马鱼，其肌细胞、生殖细胞等存在E物质受体，且幼体透明。科学家将绿色荧光蛋白（GFP）等基因转入斑马鱼，建立了一种经济且快速的水体E物质监测方法。
1. （1）将表达载体导入斑马鱼受精卵的最佳方式是。
2. （2）为监测E物质，研究者设计了下图所示的两种方案制备转基因斑马鱼，其中ERE和酵母来源的UAS是两种诱导型启动子，分别被E物质-受体复合物和酵母来源的Gal4蛋白特异性激活，启动下游基因表达。与方案1相比，方案2的主要优势是，因而被用于制备监测鱼（MO）。
3. （3）现拟制备一种不育的监测鱼SM，用于实际监测。SM需经MO和另一亲本（X）杂交获得。欲获得X，需从以下选项中选择启动子和基因，构建表达载体并转入野生型斑马鱼受精卵，经培育后进行筛选。请将选项的序号填入相应的方框中。
  Ⅰ.启动子：。
  
  ①ERE②UAS③使基因仅在生殖细胞表达的启动子（P生）④使基因仅在肌细胞表达的启动子（P肌）
  
  Ⅱ.基因：
  
  A．GFP B．Gal4 C．雌激素受体基因（ER） D．仅导致生殖细胞凋亡的基因（dg）
4. （4） SM不育的原因是：成体SM自身产生雌激素，与受体结合后造成不育。
5. （5）使拟用于实际监测的SM不育的目的是。
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