小明欲从土壤中分离尿素分解菌，请回答下列问题：

1. (2019高三上·莲湖期中) 小明欲从土壤中分离尿素分解菌，请回答下列问题：
1. （1）土壤中的有些细菌能分解尿素，是因为其能合成。
3. （2）选取土样后进行一系列稀释，吸取0.1 mL的10⁶倍稀释的菌液在灭菌板上进行接种，采用该种接种方法的目的是。该实验过程中，还设置了一个空白平板，空白平板可起作用。实验结果显示：平板上的菌落数为123、119、130，则每毫升土样溶液中的活菌数为个。
5. （3）其他同学认为小明的实验结果偏大，可能原因是操作出现错误。为了排除其他同学的质疑，你给小明的建议是。
7. （4）为了鉴定分离出来的菌种是否为尿素分解菌，需要在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，根据颜色是否变来鉴定。

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1. (2023高三上·龙岗月考) 土壤盐渍化影响水稻生长发育。科研人员将水稻耐盐基因0sMYB56导入不耐盐碱水稻品种吉粳88中，培育出了4株耐盐碱水稻新品种。其操作流程及相关限制酶识别序列和切割位点如下图，图中Ⅰ～Ⅲ为限制酶的酶切位点，bar抗除草剂基因， Kan为卡那霉素抗性基因。请分析回答：
限制酶
EcoRI
BamHI
HindIII
SacI
识别序列和切制位点
GAATTC
G'GATCC
A'AGCTT
GAGCT'C
1. （1）过程①需要催化。过程③需要用处理根瘤农杆菌，使其成为感受态细胞。
2. （2）过程①所用的一对引物如下，则过程②使用的限制酶是和。
  5’—CGCGGATCCATGAGAAAGGGCCCGTGG—3’
  5’—CGAGCTCCTATCCCCAGAGAGGTAGCGA—3”
3. （3）启动子的本质是，本研究中设计两个相同启动子分别连接bar和目的基因，其目的是。
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2. (2021高三上·罗湖月考) 基因工程中，需要用PCR技术获取大量目的基因，通常是利用质粒作为载体，将目的基因送入细胞中，PCR技术和对质粒的改造是基因工程中重要的技术过程。回答下列相关问题：
1. （1） PCR过程中加热至90―95℃以后，需要冷却到55―60℃，目的是，在PCR反应体系需要加入引物，加入引物的原因是。
2. （2）一个DNA分子上有多个基因，现需要获取其中某一个基因作为目的基因，在引物设计时，要将2种引物设计在，此时（酶）只能特异性地复制处于两个引物之间的DNA序列。
3. （3）通常用质粒作为基因工程的载体，作为基因工程载体的质粒需要满足一些条件，现有两种质粒：①质粒容易在物种之间转移，②质粒不能在物种之间转移，应该选择（选编号）作为基因工程的载体。
4. （4）载体需要在受体细胞内能进行复制，同时能够控制自身复制，阐述控制自身复制的目的是。
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3. (2021高三上·大通开学) 土壤中含有丰富的磷资源，其中只有1%左右能被植物吸收利用，其他以无机磷酸盐固体形式存在。解磷细菌可以溶解磷酸盐固体，提高土壤肥力，促进农作物的生长。科研工作者通过分离、培养解磷细菌，制备成颗粒状的菌肥，应用到农业生产中。请回答下列问题：
1. （1）欲从土壤中分离解磷细菌：首先取少量土壤，在以为唯一磷源的（填“固体”或“液体”）培养基中进行富集作用，目的是。
2. （2）企业发酵生产标准规定：当发酵液解磷细菌浓度达到2×10⁸个/mL时，发酵结束，分装入库。产品出库时需采用进行活菌计数，取0.2mL发酵液涂布时应选择稀释倍（填“10⁵”或“10⁶”）。
3. （3）农田中施用菌肥比施用化肥更具优势在于（列出两点即可）。
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1. (2021·浙江) 回答下列（1）、（2）小题：
1. （1）回答与甘蔗醋制作有关的问题：
  ①为了获得酿造甘蔗醋的高产菌株，以自然发酵的甘蔗渣为材料进行筛选。首先配制醋酸菌选择培养基：将适量的葡萄糖、KH₂PO₄、MgSO₄溶解并定容，调节pH，再高压蒸汽灭菌，经后加入3%体积的无水乙醇。然后将10 g自然发酵的甘蔗渣加入选择培养基，震荡培养24 h。用将少量上述培养液涂布到含CaCO₃的分离培养基上，在30 ℃培养48h。再挑取分离培养基上具有的单菌落若干，分别接种到与分离培养基成分相同的培养基上培养24 h后，置于4 ℃冰箱中保存。
  
  ②优良产酸菌种筛选。将冰箱保存的菌种分别接入选择培养基，培养一段时间后，取合适接种量的菌液在30 ℃、150 r/min 条件下震荡培养。持续培养至培养液中醋酸浓度不再上升，或者培养液中含量达到最低时，发酵结束。筛选得到的优良菌种除了产酸量高外，还应有（答出2点即可）等特点。
  
  ③制醋过程中，可将甘蔗渣制作成固定化介质，经后用于发酵。其固定化方法为。
2. （2）斑马鱼是一种模式动物，体外受精发育，胚胎透明、便于观察，可用于水质监测，基因功能分析以及药物毒性与安全性评价等。
  ①由于人类活动产生的生活污水日益增多，大量未经处理的污水直接排入河流、湖泊会引起水体，导致藻类大量繁殖形成水华。取水样喂养斑马鱼，可用斑马鱼每周的体重和死亡率等指标监测水体污染程度。
  
  ②为了研究某基因在斑马鱼血管发育过程中的分子调控机制，用 DNA 连接酶将该基因连接到质粒载体形成，导入到大肠杆菌菌株 DH5α 中。为了能够连接上该目的基因、并有利于获得含该目的基因的 DH5α 阳性细胞克降，质粒载体应含有（答出2点即可）。提取质粒后，采用法，将该基因导入到斑马鱼受精卵细胞中，培养并观察转基因斑马鱼胚胎血管的发育情况。
  
  ③为了获取大量斑马鱼胚胎细胞用于药物筛选，可用分散斑马鱼囊胚的内细胞团，取分散细胞作为初始材料进行培养。培养瓶中添加成纤维细胞作为，以提高斑马鱼胚胎细胞克隆的形成率。
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2. (2021·广东) [选修1：生物技术实践]
中国科学家运用合成生物学方法构建了一株嗜盐单胞菌H，以糖蜜（甘蔗榨糖后的废弃液，含较多蔗糖）为原料，在实验室发酵生产pHA等新型高附加值可降解材料，期望提高甘蔗的整体利用价值。工艺流程如图。

回答下列问题：
1. （1）为提高菌株H对蔗糖的耐受能力和利用效率，可在液体培养基中将蔗糖作为，并不断提高其浓度，经多次传代培养（指培养一段时间后，将部分培养物转入新配的培养基中继续培养）以获得目标菌株。培养过程中定期取样并用的方法进行菌落计数，评估菌株增殖状况。此外，选育优良菌株的方法还有等。（答出两种方法即可）
2. （2）基于菌株H嗜盐、酸碱耐受能力强等特性，研究人员设计了一种不需要灭菌的发酵系统，其培养基盐浓度设为60g/L，pH为10，菌株H可正常持续发酵60d以上。该系统不需要灭菌的原因是。（答出两点即可）
3. （3）研究人员在工厂进行扩大培养，在适宜的营养物浓度、温度、pH条件下发酵，结果发现发酵液中菌株H细胞增殖和pHA产量均未达到预期，并产生了少量乙醇等物质，说明发酵条件中可能是高密度培养的限制因素。
4. （4）菌株H还能通过分解餐厨垃圾（主要含蛋白质、淀粉、油脂等）来生产pHA，说明其能分泌。
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3. (2022·江苏) 纤毛是广泛存在的细胞表面结构，功能异常可引起多种疾病。因此，研究纤毛形成的作用机制具有重要意义。请回答下列问题。

（1）纤毛结构如图1所示，由细胞膜延伸形成的纤毛膜主要由组成。基体由中心体转变而来，中心体在有丝分裂中的功能是。
（2）某病人肾小管上皮细胞纤毛异常，为了分析纤毛相关基因X是否发生了变异，对基因X进行了PCR扩增与产物测序。从细胞样品中分离DNA时，可通过交替调节盐浓度将与核蛋白结合的DNA分离出来，溶液中添加NaCl至2.0mol/L的目的是。PCR扩增时，需在催化下，在引物端进行DNA链的延伸，获得扩增产物用于测序。

（3）为研究蛋白质X在细胞中的定位，构建绿色荧光蛋白GFP与X的融合蛋白，融合蛋白具有绿色荧光，可示其在细胞内位置。将X-GFP基因融合片段M导入如图Ⅱ所示载体质粒Y，构建Y-M重组质粒（在EcoRⅤ位点插入片段）。请完成下表。

分步实验目标	简易操作、结果、分析
PCR鉴定正向重组质粒Y-M（图Ⅱ中融合片段M中有白色的箭头，代表方向）	①选择图Ⅱ引物； ②PCR目的产物约为bp。
确保M及连接处序列正确，Y-M的连接处上游含有Hind III+EcoR V的识别序列，下游含有EcoR V+BamH I的识别序列	③质粒测序，图Ⅲ中正确的是（选填序列编号）
检测融合蛋白定位	④对照质粒Y-GFP（仅表达GFP）与实验质粒Y-M分别导入细胞，发现对照组整个细胞均有绿色荧光，而实验组荧光集中在纤毛基部，说明。

（4）为研究另一纤毛病相关基因Z表达的变化，采用荧光定量PCR法检测健康人与病人基因Z的转录水平。采集样本、提取总RNA，经形成cDNA作为模板，PCR扩增结果显示，在总cDNA模板量相等的条件下，健康人Ct值为15，而病人Ct值为20（Ct值是产物荧光强度达到设定阈值时的PCR循环数）。从理论上估算，在PCR扩增20个循环的产物中，健康人样品的目的产物大约是病人的倍。

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限制酶	EcoRI	BamHI	HindIII	SacI
识别序列和切制位点	GAATTC	G'GATCC	A'AGCTT	GAGCT'C

1. (2019高三上·莲湖期中) 小明欲从土壤中分离尿素分解菌，请回答下列问题：

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