当前位置: 高中生物学 /
  • 1. (2019·南通模拟) 科研人员运用两种方法分离杜氏盐藻、球等鞭金藻细胞的叶绿体,并提取叶绿体DNA,主要实验步骤和结果如下,其中SDS能瓦解生物膜,氯仿异戊醇不溶于水且密度均大于水,DNA不溶于氯仿异戊醇。请回答:

    步骤①收集藻细胞:将两种藻细胞培养液进行预处理后,离心取沉淀物。

    步骤②获取叶绿体粗:提物4℃下分别破碎两种藻细胞后,再分别用差速离心法和密度梯度离心法分离获取叶绿体粗提物(原理示意图如下)。

    步骤③去除杂质DNA:向步骤②的叶绿体粗提物中加入DNA酶、缓冲液,37℃静置15min后,离心取沉淀物。

    步骤④粗提叶绿体DNA:向步骤③获得的叶绿体中加入缓冲液、SDS、蛋白酶K,60℃水浴2h,离心取上清液。再向上清液中加入氯仿异戊醇,在4℃下离心取 ? 

    步骤⑤纯化叶绿体DNA:向粗提溶液中加入3mol·L-1醋酸钠及预冷的95%酒精,低温静置1h后,离心弃上清液。加预冷的95%酒精、离心洗涤1~2次,取沉淀物用超纯水溶解。

    步骤⑥DNA纯度和浓度:测定利用分光光度法测量并计算叶绿体DNA的纯度及浓度,结果如上下表(表中OD260/OD280值越接近1.8说明DNA越纯)。

    1. (1) 步骤①中预处理时应将藻液置于处24h,以降低叶绿体中淀粉粒的含量,有利于分离得到完整叶绿体。步骤②在利用差速离心法分离获得叶绿体前,需要先在(填“低于”“等于”或“高于”)4 000r·min-1下离心去除细胞壁、核物质等。
    2. (2) 步骤③依据的主要原理是,去除的“杂质DNA”来源于
    3. (3) 步骤④中离心后应取。步骤⑤中用95%的冷酒精离心洗涤过程要注意动作轻缓,其目的是
    4. (4) 根据实验结果分析,法较适于分离提取叶绿体DNA,原因是

微信扫码预览、分享更方便